O Experimento de Meselson e Stahl
Meselson e Stahl convincentes demonstraram que a replicação em E.coli é semiconservativa. Para esse experimento eles utilizaram o Nitrogênio 14N e isótopos de nitrogênio- nitrogênio pesado 15N que tem um grande peso atômico.
Como ocorreu o experimento:
Responsáveis: Matthew Meselson e Franklin Stahl.
Ano: 1958
Modo de identificação: marcaram o DNA por incorporação de nitrogênio pesado 15N.
Objetivo: Descobrir de que forma ocorre a reprodução do DNA , ou seja a replicação.
O experimento foi possível graças ao desenvolvimento de análises bioquímicas que ocorreu ao longo da década de 1950. Meselson e Stahl tinham por objetivo marcar as duas cadeias de DNA, podendo assim monitorar o destino dessas cadeias após a sua replicação.
A1.1-) Cultivaram bactérias E.coli num meio com 15N (Isótopo pesado de Nitrogênio ), depois centrifugaram seu DNA.
1.1Todas as novas cadeias originadas após a cultivação tinham apenas 15N.
A1.2-) Cultivaram bactérias E.coli na presença de 14N (Isótopo normal de nitrogênio), depois centrifugaram o DNA.
1.2 Todas as novas cadeias originadas após a cultivação tinham apenas 14N.
A1.3-) Bactérias E.coli foram cultivas em um meio para reprodução
A1.4-) Após reprodução o DNA de uma bactéria foi colhido.
Esse DNA foi purificado e centrifugado para análise de densidades.
Resultado: verificaram que a densidade de flutuação variava entre os valores de 15N (mais denso) e 14N (menos densas), mostrando que após a replicação cada dupla hélice de DNA continham quantidades mais o menos iguais de 15N e 14N.
Fonte: https://www.esec-odivelas.rcts.pt/BioGeo/ficha_trab2.htm
Figura 29: Meselson e Stahl demonstraram a diferença de densidades entre as duplas hélices de DNA, antes e após a replicação.
Analisando esse resultado percebemos que ele se encaixa tanto na hipótese de replicação dispersiva quanto na hipótese de replicação semi-conservativa.
Experimento para a diferenciação entre replicação dispersiva e replicação semi-conservativa:
B.1-) Bactérias foram cultivadas novamente com a intenção que elas se reproduzissem. Foram analisados 3 tempos de reprodução diferente.
B.2-) Células foram removidas e seus DNA foram purificados para serem estudados
B.3-) Foi centrifugada uma amostra de DNA e analisada a sua densidade.
Fonte: https://www.esec-odivelas.rcts.pt/BioGeo/ficha_trab2.htm
Figura 30: experimento de Meselson Stahl: etapas desse experimento que comprovou que a replicação do DNA é semi-conservativa e não dispersiva.
Resultado: surgiram dois lados uma hélice com densidade maior formada por 15N e outra hélice com densidade menor formada por 14N.
Esse resultado se encaixa totalmente na hipótese de replicação semi-conservativa.
Descoberta a forma como se dava a replicação faltava agora se aprofundar e saber o mecanismos desse processo.